LCGreen Plus Melting Dye(LCGreen Plus荧光染料)

货号:BCHM-ASY-0005

品名:LCGreen Plus Melting Dye(LCGreen Plus荧光染料)

品牌:biofiredefense

规格:1000 Reactions

价格:请询价

关键词:

LCGreen Plus熔解染料、高分辨率熔解曲线分析HRM、基因分型试剂、SNP检测、甲基化分析、病原体耐药基因筛查、荧光染料HRM、BioFire Defense试剂、PCR产物分析、DNA序列变异检测、HRM仪器兼容、单碱基突变检测、临床分子诊断试剂、科研用荧光染料、DNA熔解温度测定、HRM数据分析软件、低频突变筛查、非标记探针技术、快速PCR熔解分析、HRM实验优化方案

 

产品详情介绍

一、产品描述

货号：BCHM-ASY-0005  

英文名：LCGreen® Plus Melting Dye  

中文名：LCGreen® Plus 熔解染料  

品牌：BioFire Defense  

规格：1000次反应  

适用仪器：兼容96孔或384孔微量滴定板的熔解设备。  

激发/发射波长：最佳激发波长440-470 nm，最佳发射波长470-520 nm。  

浓度规格：10×浓缩液，每1000次反应需1 mL原液。  

LCGreen® Plus Melting Dye 是由 BioFire Defense 公司研发的高性能荧光染料，专为高分辨率熔解曲线分析设计。该染料通过实时监测PCR产物在升温过程中的荧光强度变化，精准识别DNA双链解链行为，从而检测序列微小差异。其独特的化学结构在高温变性时不会迁移至解链DNA区域，确保熔解曲线分辨率高达0.1°C，适用于基因分型、病原体鉴定、甲基化分析及质量控制等领域。  

 

二、产品特点

1. 超高分辨率  

   • 区分单碱基差异，熔解曲线峰形差异显著。  

   • 支持400 bp以内短片段分析，适合高密度位点筛查。  

2. 闭管操作，零污染  

   • 无需开盖加探针，降低交叉污染风险，适合临床样本检测。  

3. 成本效益高  

   • 直接替代传统TaqMan探针法，节省50%以上成本。  

4. 快速实验流程  

   • 全程仅需15分钟（传统方法需2小时），支持高通量样本处理。  

5. 数据稳定性强  

   • 高信噪比，重复性CV值<2%，确保结果可靠。  

6. 广泛兼容性  

   • 适用于主流HRM仪器，兼容SYBR Green I等常规荧光染料平台。  

 

三、储存条件

• 长期储存：-20°C避光干燥环境，避免湿度波动。  

• 短期使用：2-8°C冷藏可保存1个月，建议分装后使用。  

• 运输要求：全程干冰运输，避免温度波动导致染料降解。  

• 开封后：需密封保存，建议30天内用完。  

 

四、工作原理

LCGreen® Plus Melting Dye 通过动态结合双链DNA小沟区域，实时监测PCR产物熔解过程。其作用机制如下：  

1. 结合特性：在低温（如65°C）下，染料嵌入dsDNA，荧光强度增强；升温至DNA解链温度（Tm）时，染料释放，荧光骤降。  

2. 分辨率优势：作为“饱和染料”，其高浓度特性可覆盖所有dsDNA结合位点，避免因染料迁移导致的信号干扰，确保熔解曲线平滑且分辨率极高。  

3. 甲基化检测：通过MS-HRM技术，定量分析DNA甲基化水平，适用于癌症研究。  

 

五、解决实验中的核心问题

1. 突变检测难题  

   • 传统方法难以区分单碱基突变，而LCGreen® Plus可精准识别0.1%的低频突变等位基因。  

2. 非特异性扩增干扰  

   • 通过高分辨率熔解曲线分析，有效排除引物二聚体或非特异性产物的干扰，提升实验准确性。  

3. 甲基化定量需求  

   • 传统亚硫酸盐测序成本高，本产品结合HRM技术实现快速、低成本的甲基化水平评估。  

4. 病原体耐药性筛查  

   • 快速检测结核分枝杆菌等病原体的耐药基因突变，缩短诊断周期。  

5. 实验成本控制  

   • 无需定制探针，直接替代TaqMan探针法，降低试剂成本50%以上。  

 

六、使用方法

步骤1：试剂准备  

• 将LCGreen® Plus从-20°C取出，室温解冻后轻轻混匀。  

• 推荐工作浓度：每9体积PCR反应体系中加入1体积10×染料溶液。  

步骤2：PCR扩增  

• 按标准程序进行PCR扩增，确保退火温度优化。  

• 注意：避免使用含EDTA的PCR缓冲液，以免影响染料结合效率。  

步骤3：熔解曲线分析  

• 设置仪器程序：  

  • 95°C保持30秒；  

  • 降温至65°C保持30秒（退火）；  

  • 缓慢升温至95°C（推荐速率0.1-0.2°C/秒），实时采集荧光信号。  

步骤4：数据分析  

• 使用HRM分析软件生成差异图，对比标准品判断突变类型。  

注意事项：  

• 避免污染：操作全程使用无核酸酶耗材。  

• 光敏感：染料需避光保存及操作。  

 

七、常见问题与解决方案

问题1：熔解曲线背景信号高  

• 原因：染料浓度过高或模板DNA过量。  

• 解决：优化染料浓度，减少模板量至10-50 ng。  

问题2：Tm值偏移  

• 原因：仪器温度校准偏差或染料批次差异。  

• 解决：定期校准仪器，使用标准品校准Tm值。  

问题3：无法区分A/T与C/G突变  

• 原因：HRM对A/T和C/G突变的区分度有限。  

• 解决：结合探针法或LNA修饰引物增强特异性。  

问题4：样本抑制现象  

• 原因：样本中存在抑制剂。  

• 解决：纯化样本或添加BSA中和抑制物。  

问题5：重复性差  

• 原因：仪器孔间温度不均或操作误差。  

• 解决：使用高分辨率仪器（孔间温差≤0.1°C），规范操作流程。  

 

八、免责声明

1. 本文内容基于品牌公开资料及行业常规信息整理，仅个人观点，具体以品牌信息文档为准。

2. 本产品仅限科研用途，不得用于临床诊断或治疗。  

3. 实验结果受仪器性能、操作规范及样本质量影响，本公司不承担因误用导致的后果。  

4. 产品储存及运输需严格遵循说明书要求，因保存不当造成的失效不在质保范围内。  

5. 使用前请务必阅读完整说明书，并参考最新文献优化实验方案。  

关键词：LCGreen Plus熔解染料、高分辨率熔解曲线分析HRM、基因分型试剂、SNP检测、甲基化分析、病原体耐药基因筛查、荧光染料HRM、BioFire Defense试剂、PCR产物分析、DNA序列变异检测、HRM仪器兼容、单碱基突变检测、临床分子诊断试剂、科研用荧光染料、DNA熔解温度测定、HRM数据分析软件、低频突变筛查、非标记探针技术、快速PCR熔解分析、HRM实验优化方案

 

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